Calculadora de la ley de Beer-Lambert
Resuelve la ley de Beer-Lambert, A = ε · l · c, para cualquier valor: concentración, absorbancia, absortividad molar (coeficiente de extinción) o longitud de trayecto. Introduce una lectura como absorbancia o como porcentaje de transmitancia y obtén concentraciones molares o másicas con el cálculo detallado.
Última actualización:
También se escribe M⁻¹cm⁻¹ (multiplica mM⁻¹cm⁻¹ por 1,000)
También es la unidad de la respuesta al calcular la concentración
Para concentraciones másicas (p. ej., BSA 66,430)
Cómo usar Calculadora de la ley de Beer-Lambert
- Elige qué quieres calcular: concentración, absorbancia, ε o longitud de trayecto.
- Introduce tu lectura como absorbancia o cambia el tipo de lectura a %T.
- Completa los valores conocidos: ε en L·mol⁻¹·cm⁻¹, longitud de trayecto (1 cm para una cubeta estándar) y la concentración si hace falta.
- Elige la unidad de concentración. Añade una masa molar para trabajar en mg/mL o µg/mL.
- Pulsa Calcular para obtener la respuesta, la transmitancia y una curva patrón que puedes descargar.
Fórmulas de la ley de Beer-Lambert
- Absorbancia: A = ε · l · c
- Concentración: c = A / (ε · l)
- Absortividad molar: ε = A / (l · c)
- Longitud de trayecto: l = A / (ε · c)
- Transmitancia: T = I / I₀ = 10−A; A = −log₁₀ T = 2 − log₁₀(%T)
- Concentración másica: g/L = mol/L × masa molar. Absortividad másica (L·g⁻¹·cm⁻¹) = ε ÷ masa molar.
Absorbancia y transmitancia
| Absorbancia | % de transmitancia | % de luz absorbida |
|---|---|---|
| 0 | 100% | 0% |
| 0.1 | 79.4% | 20.6% |
| 0.301 | 50% | 50% |
| 0.5 | 31.6% | 68.4% |
| 1 | 10% | 90% |
| 1.5 | 3.16% | 96.8% |
| 2 | 1% | 99% |
| 3 | 0.1% | 99.9% |
Ejemplos de absortividad molar
Valores aproximados de la bibliografía; comprueba el valor para tus condiciones exactas (longitud de onda, tampón, pH) antes de confiar en él.
| Sustancia | Longitud de onda | ε (L·mol⁻¹·cm⁻¹) |
|---|---|---|
| NADH / NADPH | 340 nm | 6,220 |
| Albúmina de suero bovino (BSA) | 280 nm | ≈ 43,800 |
| Triptófano | 280 nm | ≈ 5,500 |
| Tirosina | 280 nm | ≈ 1,490 |
| p-Nitrofenolato (alcalino) | 405 nm | ≈ 18,000 |
Consejos para buenas mediciones
- Primero el blanco. Pon a cero el instrumento con una cubeta que contenga solo el disolvente o el tampón para medir únicamente la absorbancia de la muestra.
- Mantente en el rango. Busca lecturas entre 0.1 y 1.0. Diluye las muestras concentradas y recuerda multiplicar el resultado por el factor de dilución.
- Comprueba la longitud de trayecto. Las cubetas estándar son de 1 cm, pero los pocillos de microplaca y los instrumentos de microvolumen usan trayectos más cortos que dependen del volumen.
- Usa la longitud de onda correcta. ε solo es válido a la longitud de onda a la que se midió, normalmente el máximo de absorción.
- Haz una curva patrón cuando importe la precisión: la tabla debajo de los resultados muestra la absorbancia que deberías esperar a otras concentraciones.
Preguntas frecuentes
¿Qué es la ley de Beer-Lambert?
La ley de Beer-Lambert establece que la absorbancia es proporcional a la concentración y a la longitud de trayecto: A = ε · l · c, donde ε es la absortividad molar (L·mol⁻¹·cm⁻¹), l es la longitud de trayecto en centímetros y c es la concentración en mol/L. La absorbancia en sí no tiene unidades.
¿Cómo calculo la concentración a partir de la absorbancia?
Divide la absorbancia entre la absortividad molar multiplicada por la longitud de trayecto: c = A / (ε · l). Para NADH a 340 nm (ε = 6,220 M⁻¹cm⁻¹) en una cubeta de 1 cm, una absorbancia de 0.45 significa c = 0.45 / 6,220 = 7.23 × 10⁻⁵ M, o unos 72 µM.
¿Cómo convierto la transmitancia en absorbancia?
Usa A = −log₁₀(T), donde T es la fracción de luz transmitida, o A = 2 − log₁₀(%T). Por ejemplo, un 10% T es una absorbancia de 1, un 1% T es 2 y un 50% T es aproximadamente 0.301.
¿Qué es la absortividad molar?
La absortividad molar, también llamada coeficiente de extinción molar, mide con qué intensidad una sustancia absorbe la luz a una longitud de onda concreta. Es la absorbancia de una solución 1 M en un trayecto de 1 cm. Depende de la sustancia, de la longitud de onda y a veces del disolvente y del pH.
¿Qué rango de absorbancia es preciso?
La mayoría de los espectrofotómetros son más fiables entre aproximadamente 0.1 y 1.0 unidades de absorbancia. Por encima de 1.5 a 2 llega tan poca luz al detector que la luz parásita provoca errores, y la ley también puede fallar a concentraciones altas porque las moléculas interactúan. Diluye las muestras concentradas para que entren en el rango.
¿Cómo obtengo ε a partir de mis propios datos?
Mide la absorbancia de varias concentraciones conocidas y representa la absorbancia frente a la concentración. La pendiente de la recta es igual a ε · l, así que con una cubeta de 1 cm la pendiente es ε. Con un solo patrón, ε = A / (l · c).
¿Se prueban todas las herramientas de FreeToolCabin para comprobar su calidad y precisión?
Sí. Cada herramienta del sitio pasa pruebas automáticas en navegadores reales para comprobar que el resultado es correcto y que no hay errores. Si encuentras un fallo o tienes una sugerencia, escríbenos a [email protected] y lo revisaremos.